Osservazione dinamica della formazione di sferoidi melanocitici indotti da ripetute e prolungate tripsinizzazioni.

Abstract

Obiettivo. Osservare i cambiamenti nelle forme e nei modelli di crescita dei melanociti (MC) dopo aver ricevuto due trattamenti di tripsinizzazione a lungo termine ( TLT) per 2 ore ciascuno.
Metodi. Le cellule epidermiche primarie sono state ottenute dai tessuti del prepuzio, ricavati dalle circoncisioni di routine. Anticorpi specifici per cheratina 15 (K15) e melanosomi (HMB-45) sono stati utilizzati per identificare rispettivamente cheratinociti (KC) e MC. I MC sono stati ricavati tramite tripsinizzazione differenziata e poi sono stati ulteriormente coltivati. Quando sono diventati confluenti al 70%, i MC sono stati trattati con TLT e sottocoltivati. Dopo circa 1 settimana, il trattamento di cui sopra è stato ripetuto. I cambiamenti nella morfologia e nei modelli di crescita dei MC sono stati osservati quotidianamente, fotografati e analizzati.
Risultati. Alla colorazione con immunofluorescenza i MC e i KC presenti nelle colture epidermiche si distinguevano perché i MC presentavano dendriti e i KC forme ad acciotolato. I MC sono stati purificati mediante tripsinizzazione differenziata e sono apparsi come cellule dendritiche, in crescita monostrato, con un tempo di raddoppio di 3-5 giorni. Dopo 2 ore di TLT, questi MC proliferavano più rapidamente con un tempo di raddoppio di 2-3 giorni. Nel frattempo, il numero e la lunghezza dei dendriti si riducevano, la maggior parte dei MC era bipolare e alcuni avevano tre dendriti. Dopo la seconda TLT, i MC sono diventati a forma di bastoncino corto o fusiformi, con un tempo di raddoppio inferiore a 2 giorni. Alcuni aggregati o sferoidi di MC sono apparsi gradualmente e sono aumentati di dimensioni nel tempo della coltura. Ogni sferoide di MC (SM) conteneva 3-30 MC, con varie morfologie e dimensioni all’interno dello stesso sferoide. Quando gli SM sono stati prelevati e riseminati, le cellule dendritiche sono migrate e si sono espanse circondando gli sferoidi, sono proliferate rapidamente, sono cresciute in monostrato essendo morfologicamente simili ai MC primari.
Conclusioni. TLT ha ridotto il numero di dendriti e il tempo di raddoppio dei MC. Due trattamenti ripetuti di TLT possono indurre la formazione di SM.